Qu’est-ce qui est utilisé pour fusionner les cellules d’hybridome ?
La technologie des hybridomes est l’une des principales méthodes de préparation d’anticorps monoclonaux. La clé est de fusionner les cellules B immunitaires avec les cellules du myélome pour former des cellules d’hybridome. Cet article mènera une analyse structurée autour des méthodes de fusion, des réactifs clés et des procédures opérationnelles des cellules d’hybridome, et joindra des comparaisons de données pertinentes.
1. Méthodes de base de fusion de cellules d’hybridomes
| Méthode de fusion | Principe | Avantages | limites |
|---|---|---|---|
| Fusion médiée par le PEG | Le polyéthylène glycol déstabilise les membranes cellulaires | Faible coût et fonctionnement simple | Le taux de fusion est faible (environ 1×10⁻⁵) |
| Méthode d'électrofusion | Des impulsions à haute tension perforent les membranes cellulaires | Efficacité de fusion élevée (jusqu'à 80 %) | L'équipement est cher et les exigences techniques sont élevées |
| fusion médiée par un virus | Le virus Sendai induit une fusion membranaire | processus de fusion naturelle | Risques de biosécurité, mauvaise reproductibilité |
2. Comparaison des performances des réactifs couramment utilisés
| Type de réactif | Produits typiques | concentration | Temps d'action |
|---|---|---|---|
| Solution PEG | PEG1500 | 50 % (p/v) | 1-2 minutes |
| Tampon d'électrofusion | Solution de mannitol | 0,3M | Temps d'impulsion 10μs |
| Médias de dépistage | CHAPEAU moyen | 1× | Formation continue |
3. Étapes clés du processus opérationnel
1.Prétraitement cellulaire: Les cellules immunitaires de la rate et les cellules du myélome sont mélangées dans un rapport de 5 : 1 et centrifugées pour éliminer les protéines sériques.
2.réaction de fusion: Utilisez la méthode de centrifugation par gradient pour ajouter progressivement la solution de PEG et contrôlez avec précision le temps de réaction dans un bain-marie à 37°C.
3.culture sélective: Utiliser le milieu HAT (contenant de l'hypoxanthine-aminoptérine-thymidine) pour cribler les cellules d'hybridome.
4.culture clonale: Obtenez des lignées cellulaires monoclonales grâce à la méthode de dilution limitante et détectez la sécrétion d'anticorps par ELISA.
4. Direction de l'optimisation technique
| Optimiser les dimensions | Mesures spécifiques | effet attendu |
|---|---|---|
| Efficacité de la fusion | Optimisation des paramètres du champ électrique pulsé | Augmenté à plus de 85 % |
| activité cellulaire | Ajouter des antioxydants | Taux de survie augmenté de 30 % |
| Vitesse de dépistage | Cueillette de clones automatisée | Réduire les heures de travail de 50 % |
5. Dernières tendances du secteur (points chauds des 10 derniers jours)
1. Le dernier rapport dans « Nature Protocols » montre que l'efficacité de la formation d'hybridomes peut dépasser 90 % en utilisant la technologie de fusion de puces microfluidiques.
2. Une entreprise biologique de Shanghai a lancé un nouveau type d’instrument d’électrofusion. Sa conception de forme d'onde brevetée contrôle le taux de mort cellulaire en dessous de 5 %.
3. La technologie d'édition génétique CRISPR a commencé à être appliquée à la transformation des lignées cellulaires de myélome, améliorant considérablement la stabilité de la sécrétion d'anticorps.
En résumé, la technologie de fusion de cellules d’hybridomes évolue vers une efficacité et une standardisation élevées. Les chercheurs doivent faire un choix raisonnable entre la méthode PEG traditionnelle et la technologie émergente d’électrofusion en fonction des besoins expérimentaux et des conditions de l’équipement.
Vérifiez les détails
Vérifiez les détails
fr
